分子克隆和質(zhì)粒載體構建

  分子克隆是指在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，
用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過(guò)轉化與轉導的方式，引入
適合的寄主體內得到復制與擴增，然后再從篩選的寄主細胞內分離提純所需的克隆載體，
可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴增。

  載體構建是分子生物學(xué)研究中最常用的實(shí)驗技術(shù)。為把DNA分子運送到受體細胞中去，
必須尋找一種能進(jìn)入細胞、在裝載了外來(lái)的DNA片段后仍能照樣復制的運載體。理想的運
載體是質(zhì)粒(plasmid)，在基因工程中，常用人工構建的質(zhì)粒作為載體

本公司可以根據您的實(shí)驗要求為您完成分子克隆和載體構建及改造的任務(wù)。

一、載體構建的基本實(shí)驗步驟

(1)目的DNA片段和載體的制備；

(2)目的DNA片段和載體的連接；

(3)連接產(chǎn)物的轉化；

(4)克隆篩選。

(5)測序驗證及結果交付；

二、詳細內容
1、以PCR擴增為基礎的各類(lèi)載體構建，如大腸桿菌表達載體、酵母表達載體、桿狀病毒表達載體、哺乳動(dòng)物表達載體、報告基因載體、細菌表達載體 、穿梭質(zhì)粒等；
2、基因定點(diǎn)突變，包括單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達載體構建；
5、過(guò)表達載體構建。